چگونه از آلودگي كشت سلولي جلوگيري كنيم؟
در داخل بدن، سلول ها توسط سيستم ايمني بسيار پيشرفته و پيشرفته محافظت مي شوند. پس از جداسازي از بافت ها، سلول ها در كشت “به تنهايي” هستند. بنابراين ما بايد آنها را با تكنيك‌هاي آسپتيك دقيق محافظت كنيم تا از آلودگي آنها به ميكروارگانيسم‌هايي كه در اطراف ما، از جمله داخل آزمايشگاه وجود دارند، جلوگيري كنيم.
انواع مختلفي از آلودگي وجود دارد: براي مثال، سلول ها مي توانند با باكتري، مايكوپلاسما يا كپك آلوده شوند. شناسايي برخي از آنها سخت تر از ديگران است (مانند مايكوپلاسما) و بنابراين بدون اينكه شما بدانيد مي تواند تاثير زيادي بر نتايج شما داشته باشد. ديگران قابل توجه خواهند بود و شما را مجبور مي كنند آزمايش هاي خود را قطع كنيد – كه باعث اتلاف وقت، انرژي و پول مي شود. آلودگي هاي آزمايشگاهي مي تواند براي دانشمندان يك كابوس باشد، به خصوص كه مي تواند از يك نمونه به همه نمونه هاي موجود در همان انكوباتور يا هود سرايت كند. بنابراين، مسئوليت مهمي براي همه افراد آزمايشگاه است كه تا حد امكان مراقب باشند، نه تنها به خاطر آزمايش هاي خود، بلكه به خاطر آزمايش هاي ديگران نيز.
اقدامات براي جلوگيري از آلودگي متعدد است و بايد در طول حمل و نقل اعمال شود. با تجربه، اين اقدامات به ماهيت دوم تبديل مي شوند، اما هنوز هم مي توان اشتباهات غيرارادي را آسان كرد. در حالي كه زمينه كشت سلولي در حال حركت به سمت سطوح بالاتر اتوماسيون تا حدي براي جلوگيري از آلودگي سلولي است، از امروز ما هنوز بيشتر به كار دستي متكي هستيم، كه فرصت هاي زيادي براي اشتباهات در جابجايي آسپتيك، به ويژه براي مبتديان فراهم مي كند.
در اينجا، نكات ضروري براي حفظ محيط آسپتيك و جلوگيري از آلودگي كشت سلولي را ارائه مي دهيم.
1. از دستكش، كت هاي آزمايشگاهي و استفاده از هود استفاده كنيد
ناگفته نماند كه شما بايد يك مانع بين سلول هاي خود و محيط غير استريل كه آزمايشگاه شما (يا در واقع خودتان) است ايجاد كنيد. استفاده از دستكش، روپوش آزمايشگاهي و هود اين كار را انجام مي دهد. از روكش هاي آزمايشگاهي خود فقط در داخل آزمايشگاه كشت سلولي خود استفاده كنيد و مرتباً آنها را تميز كنيد. اطمينان حاصل كنيد كه هود شما اغلب سرويس مي شود تا اطمينان حاصل شود كه به درستي كار مي كند توجه داشته باشيد كه بسته به سطح محافظتي كه از سلول ها و كاربران مي خواهيد، انواع مختلفي از هودها وجود دارد .
2. از هود خود به درستي استفاده كنيد
داشتن هود براي اطمينان از محيط استريل كافي نيست: بايد به درستي از آن استفاده كنيد. ابتدا مطمئن شويد كه جريان هوا را در داخل هود مسدود نمي كنيد: مواد را روي خروجي ها يا ورودي هاي هوا كه اغلب در جلو و پشت فضاي نيمكت شما در داخل هود يافت مي شوند قرار ندهيد. علاوه بر اين، مطمئن شويد كه در داخل هود به خوبي كار مي كنيد، نه خيلي نزديك به لبه تا مطمئن شويد كه در واقع در شرايط استريل كار مي كنيد. ممكن است بخواهيد در پايان روز هود خود را خالي كنيد و قبل و بعد از هر بار استفاده حتما آن را با اتانول 70 درصد يا 70 درصد IMS پاك كنيد. برخي از گروه‌ها انتخاب مي‌كنند كه يك سطل زباله در داخل هود داشته باشند، اگر داريد، آن را خالي كنيد و مرتباً تميز كنيد. برخي ديگر ترجيح مي دهند آن را خارج از هود نگه دارند، زيرا استفاده از مواد يا معرف ها براي مدت طولاني در داخل هود مي تواند خطر آلودگي را افزايش دهد. در نهايت، هودها اغلب با نور ماوراء بنفش عرضه مي‌شوند: آن را در پايان روز روشن كنيد تا هود خود را در حالي كه از آن استفاده نمي‌كنيد، استريل كنيد.
3. دستگاه جوجه كشي و حمام آب خود را به طور مرتب تميز كنيد
برخي از انكوباتورهاي جديد داراي ظرفيت خود تميز شوندگي هستند – برخي ديگر بايد به صورت دستي تميز شوند. اين كار را اغلب انجام دهيد؛ پروتكل بسته به انكوباتور متفاوت خواهد بود. اگر از سيني آب در داخل دستگاه جوجه كشي استفاده مي كنيد، آب را اغلب تعويض كنيد. ممكن است گاهي لازم باشد براي جلوگيري از آلودگي يك ماده شيميايي به آب اضافه كنيد (هميشه بررسي كنيد كه اين ماده شيميايي با موادي كه سيني شما از آن ساخته شده است، سازگار است). به طور مشابه، آب حمام آبي كه در آن محيط خود را گرم مي كنيد بايد به طور مرتب تعويض شود. هر بار كه آن را عوض مي كنيد، يك حمام آب اضافه كنيد.
4. همه چيز را با اتانول يا IMS اسپري كنيد
اتانول معمولاً براي از بين بردن باكتري ها استفاده مي شود. اطمينان حاصل كنيد كه از اتانول 70 درصد مخلوط با آب استفاده مي كنيد، نه غلظت كمتر. اين آب به دليل افزايش كارايي اتانول در كشتن باكتري ها و برخي ويروس ها شناخته شده است. دستكش ها و هر چيزي كه داخل كاپوت مي آوريد با اتانول اسپري كنيد. توجه به اين نكته مهم است كه هر بار كه چيزي خارج از كاپوت را لمس مي‌كنيد، بايد قبل از قرار دادن دستكش در داخل هود، دوباره آن را اسپري كنيد. اين امر در مورد اتوماسيون هايي كه ممكن است مورد توجه قرار نگيرند مانند حركت دادن صندلي، پرتاب چيزي به خارج از كاپوت يا دست زدن به عينك صدق مي كند. براي برچسب زدن ظروف آزمايشگاهي خود، نشانگرهاي ضد اتانول بخريد، در غير اين صورت اسپري كردن اتانول روي آن برچسب شما را پاك مي كند.
5. قرار گرفتن سلول ها در محيط هاي غير استريل را به حداقل برسانيد
از آنجايي كه تلاش زيادي براي حفظ يك محيط استريل در داخل انكوباتور و هود انجام مي شود، مطمئن شويد كه زمان صرف سلول ها در خارج از اين محيط ها را به حداقل برسانيد. به عنوان مثال، هنگامي كه آنها را زير ميكروسكوپ بررسي مي كنيد، يا زماني كه آنها را از دستگاه جوجه كشي به هود منتقل مي كنيد. اگر مجبوريد سلول هاي خود را براي مدت طولاني در شرايط غير استريل استفاده كنيد، به عنوان مثال در طول تصويربرداري تايم لپس، و بايد سلول ها را دوباره در انكوباتور قرار دهيد، در صورت امكان يك انكوباتور جداگانه براي اين منظور تعيين كنيد. به اين ترتيب، افزايش خطر آلودگي به يك انكوباتور محدود مي شود.
6. معرف هاي استريل بخريد و آنها را استريل نگه داريد!
حتما معرف هايي را خريداري كنيد كه استريل هستند. اين شامل رسانه ها، PBS يا هر محصول ديگري است كه با سلول ها در تماس است. اگر از معرف‌ها براي كارهاي ديگري كه استريل نيستند، مانند آنتي‌بادي‌ها استفاده مي‌كنيد، از آنها براي كشت سلولي خود استفاده نكنيد. دو انبار جداگانه از معرف هاي استريل و غير استريل نگه داريد. علاوه بر اين، شما همچنين مي توانيد انتخاب كنيد كه رسانه خود (يا هر معرف مايع ديگر) را از طريق غشاهايي كه باكتري ها را حذف مي كنند، فيلتر كنيد. به طور معمول، فيلترهاي 0.2 ميكرومتر براي مسدود كردن باكتري ها كافي است. راه ديگر براي حفظ استريل بودن معرف‌ها اين است كه آنها را به مقدار كافي تقسيم كنيد. به اين ترتيب، اگر يك سهم آلوده شود، كل سهام تحت تأثير قرار نمي‌گيرد، و مي‌توانيد به جاي كل سهام، يك سهم را دور بريزيد. شما همچنين مي توانيد معرف هاي از پيش تعيين شده را خريداري كنيد.
7. از ظروف آزمايشگاهي استريل استفاده كنيد
جدا از معرف‌ها، بايد ظروف آزمايشگاهي را نيز استريل كنيد كه سلول‌ها با آن در تماس هستند. براي استريل كردن آنها مي توانيد از دستگاه اتوكلاو استفاده كنيد. اما مطمئن شويد كه ظروف آزمايشگاهي شما مي توانند اتوكلاو شوند! همه مواد نمي توانند دماي اتوكلاو را حفظ كنند. براي مثال، دانشمندان اغلب پيپتاتورها يا نوك پيپت ها را اتوكلاو مي كنند. اگر مي توانيد، مواد مصرفي را بخريد كه از قبل استريل شده اند، مانند فلاسك. براي حفظ استريل بودن، كيسه فلاسك ها را فقط يك بار باز كنيد كه آن را اسپري كرده و داخل هود قرار دهيد. پس از اتمام كار، كيف را در داخل كاپوت ببنديد و سپس آن را به بيرون بازگردانيد. اگر كيسه را با نوار چسب مي‌بنديد و نوار بيرون از كاپوت است، كيف را با دست بسته نگه داريد تا زماني كه آن را بچسبانيد. اگر منبع آب تصفيه شده در آزمايشگاه خود داريد، مي توانيد آب را اتوكلاو كنيد.
8. از نكات فيلتر استفاده كنيد و آنها را اغلب تغيير دهيد
نوك پيپت كه حاوي فيلتر است از تماس محلول داخل نوك با پيپتور جلوگيري مي كند. بدون نوك فيلتر، پيپتور شما مي‌تواند آلوده شود، بنابراين هر نمونه ديگري را كه لمس مي‌كند آلوده مي‌كند اول، اين بدان معناست كه اگر يك نمونه با ميكروارگانيسم‌ها آلوده شود، مي‌تواند به نمونه‌هاي ديگر سرايت كند، اما همچنين مي‌تواند به اين معني باشد كه مي‌توانيد سلول‌ها را به طور غيرارادي از يك نمونه وارد كنيد. نمونه به ديگري به همين دليل، مطمئن شويد كه نكات خود را اغلب در طول آزمايش‌ها، به‌ويژه بين نمونه‌ها تغيير مي‌دهيد. هنگامي كه با پيپت كار مي كنيد مراقب باشيد كه نوك پيپت مستقيماً با چيز ديگري تماس نداشته باشد و اگر نوك آن را عوض كرديد. نكته مهم، اگر مي خواهيد چيزي را از بطري پيپت كنيد، از استفاده از پيپتاتوري كه بايد داخل بطري قرار دهيد، خودداري كنيد.
9. اغلب سلول هاي خود را بررسي كنيد
اگرچه برخي از آلودگي ها، مانند آلودگي هاي مرتبط با مايكوپلاسما، به سختي قابل تشخيص است، اما هميشه عاقلانه است كه سلول هاي خود را به طور منظم زير ميكروسكوپ بررسي كنيد. اگر چنين كرديد، سعي كنيد سلول هاي خود را براي مدت طولاني از انكوباتور دور نكنيد تا خطر آلودگي به حداقل برسد. شما مي توانيد باكتري هاي متحرك (با زباله هاي سلولي اشتباه نگيريد!)، تغييرات مورفولوژيكي يا نرخ تكثير غير معمول را بررسي كنيد. اگر مشكوك هستيد كه نمونه شما به مايكوپلاسما آلوده شده است، كيت هاي تجاري براي تاييد اين موضوع وجود دارد.
10. نمونه هاي آلوده خود را سفيد كنيد
اگر فكر مي كنيد نمونه شما آلوده است، آن را با 10% سفيد كننده، تريژن يا كلروس در سينك يا دور از انكوباتور براي مدتي پر كنيد. داخل سينك را خالي كنيد و ظرف كشت را دور بيندازيد. اگر متوجه شديد كه نمونه شما آلوده است، به همتايان خود، به خصوص آنهايي كه در همان انكوباتور نمونه دارند، هشدار دهيد! اين واقعاً مهم است، به آنها اجازه مي‌دهد تا به سرعت واكنش نشان دهند، بررسي كنند كه نمونه‌هايشان خوب هستند و اگر درست نيستند برنامه‌ريزي كنند. اگر امكان خالي كردن تمام نمونه هاي انكوباتور وجود دارد، دستگاه جوجه كشي را تميز كنيد.
11. از روش خوب برچسب زدن استفاده كنيد
نگه داشتن سوابق خوب از ذخاير مكمل هاي سلولي و رسانه ها به شما كمك مي كند تا منابع آلودگي را سريعتر شناسايي كنيد. اگر متوجه شديد كه برخي از سلول‌ها آلوده هستند، بايد بتوانيد سهامي را كه اين سلول‌ها به آن تعلق دارند شناسايي كنيد و آزمايش كنيد كه آيا آلودگي در كل انبار مشترك است يا خير. به طور مشابه، اگر دسته اي از رسانه ها يا مكمل هايي كه استفاده مي كرديد را مي شناسيد، مي توانيد براي جلوگيري از آلودگي مكرر، ذخاير آسيب ديده را بررسي كنيد يا دور بيندازيد. برچسب‌گذاري خوب همچنين مي‌تواند از آلودگي آزمايش‌هاي شما به انواع سلول‌هاي ديگر جلوگيري كند: شما مي‌خواهيد مطمئن شويد كه سلول‌هايي كه در داخل سنجش خود داريد همان‌هايي هستند كه فكر مي‌كنيد هستند. اين يك مشكل بزرگ در اين زمينه است، با بيش از 30000 مطالعه با استفاده از خطوط سلولي اشتباه . بنابراين، مطمئن شويد كه تمام فلاسك ها و ويال هاي خود را به درستي برچسب گذاري كرده ايد تا احتمال آلودگي متقاطع بين نمونه ها به حداقل برسد.
12. عقل سليم
آخرين اما نه كم اهميت، عقل سليم راه طولاني را براي جلوگيري از آلودگي انجام مي دهد. براي مثال، در آزمايشگاه كشت سلولي خود با باكتري ها يا كپك ها كار نكنيد. نيازي به گفتن نيست كه هيچ نمونه حاوي باكتري نبايد در انكوباتور كشت سلولي شما قرار داده شود. اگر بيمار هستيد، سعي كنيد از انجام كارهاي كشت سلولي خودداري كنيد (ما قدردان هستيم كه اين ممكن است هميشه امكان پذير نباشد). صحبت كردن در مقابل انكوباتورهاي باز يا در حين كار با هود را به حداقل برسانيد. درهاي انكوباتور را براي مدت طولاني باز نگذاريد. دست هاي خود را قبل و بعد از كشت سلولي بشوييد!