آلودگي كشت بافت و 7 گام آسان براي پيشگيري
باز هم آلودگي!
كشت بافت يك فرآيند طولاني و پر زحمت است و زماني كه قارچ يا باكتري به كشت هاي دوست داشتني ما حمله مي كند، احساس آزاردهنده مي كند.
كشت سلول ها در آزمايشگاه ها نيازمند تلاش زيادي است، از آماده سازي محيط و انتقال سلول گرفته تا نگهداري منظم. اما متأسفانه، اگر سلول‌ها آلوده شوند و كشت‌ها از بين بروند، منجر به از دست دادن زمان، تلاش و هزينه زيادي مي‌شود. اگر ندانيد كشت شما چگونه آلوده شده و چه نوع آلودگي دارد، مشكل بزرگتر مي شود!
ويرانگر است و شما چاره اي جز تكرار آزمايشات براي نجات تحقيقات خود نداريد.
انواع آلودگي كشت بافت
آلودگي كشت بافت به دو گروه آلودگي شيميايي و آلودگي بيولوژيكي طبقه بندي مي شود .
آلودگي شيميايي
آلودگي شيميايي به دليل وجود هر گونه اجزاي غير زنده اي رخ مي دهد كه بر رشد كشت شما تأثير منفي مي گذارد.
منابع و انواع آلودگي هاي شيميايي عبارتند از:
محيط كشت : محيط كشت سلولي حاوي مواد مغذي، معرف ها و آب است كه منابع اصلي آلودگي هستند.
سرم: تقويت كننده مواد مغذي براي كشت سلولي است. حاوي پروتئين، هورمون و برخي عوامل رشد است كه رشد بافت را تحريك مي كند. با اين حال، تغيير در غلظت هورمون‌ها و فاكتورهاي رشد مي‌تواند براي كشت‌هاي سلولي سمي باشد.
اندوتوكسين: محصول جانبي باكتري هاي گرم منفي است و در آب، سرم يا ساير اجزاي كشت يافت مي شود. مي توان آن را با روش ليمولوس آمبوسيت ليزات (LAL) تعيين كرد.
لوله‌هاي پلاستيكي و مخازن ذخيره‌سازي: باقيمانده‌هاي شيميايي (مواد شوينده يا ضدعفوني‌كننده‌ها) در ظرف ذخيره‌سازي تميز نشده هنگام انتقال به ظروف به داخل محيط مي‌روند. علاوه بر اين، نرم كننده ها نيز مي توانند بر رشد كشت تأثير بگذارند.
نور فلورسنت: مي‌تواند برخي از اجزاي رسانه‌اي مانند ريبوفلاوين و تريپتوفان را كه پراكسيد هيدروژن و راديكال‌هاي آزاد سمي براي سلول‌ها آزاد مي‌كنند، فعال كند.
آلودگي بيولوژيكي
آلودگي بيولوژيكي به دليل وجود موجودات زنده در كشت ايجاد مي شود. چنين ارگانيسم هايي شامل باكتري ها، مخمرها و كپك هاي به راحتي قابل شناسايي يا ويروس ها، تك ياخته ها و مايكوپلاسماها هستند.
باكتري ها، مخمرها و كپك ها در طبيعت در همه جا وجود دارند. بنابراين، آنها به راحتي مي توانند به صورت مخفيانه وارد شوند، مستعمره شوند و در كشت هاي سلولي رشد كنند. از آنتي بيوتيك ها براي جلوگيري از كشت باكتري ها استفاده مي شود، با اين حال، برخي از سويه هاي مقاوم همچنان مي توانند در آن رشد كنند.
باكتري‌هاي بسيار كوچك يا درون سلولي با رشد آهسته‌اي وجود دارند كه به سختي مي‌توان در طول بررسي‌هاي معمول كشت‌ها متوجه آنها شد. آنها مي توانند به چندين كشت آسيب جدي وارد كنند.
شناسايي ويروس، تك ياخته و مايكوپلاسما كه ماهيت درون سلولي دارند دشوار است. آنها نه تنها كل كشت سلولي را از بين مي برند بلكه خطرات بالقوه اي براي سلامت انسان نيز به همراه دارند.
بهترين راه براي جلوگيري از آلودگي چيست؟
براي جلوگيري از آلودگي و صرفه جويي در كشت و آزمايش خود، بايد اقدامات احتياطي ارائه شده در زير را «قبل و در حين» آزمايشات كشت بافت خود دنبال كنيد:
دستكش و كت آزمايشگاه بپوشيد و سازماندهي كنيد: آيا تا به حال فكر كرده ايد كه ممكن است خودتان سلول هاي كشت شده را آلوده كنيد؟ بله اين درست است! بدن انسان مملو از باكتري است. بنابراين، بهتر است از دستكش و كت آزمايشگاهي خود استفاده كنيد. بايد در داخل آزمايشگاه نگهداري شود و به طور مرتب تميز شود. همچنين مي‌توانيد چيزهايي را كه بايد به اتاق تأسيسات ببريد فهرست كنيد و اين به شما كمك مي‌كند تا آزمايش‌هاي خود را در يك مرحله به پايان برسانيد.
از مواد شيميايي با عيار بالا استفاده كنيد: در آزمايشات خود فقط از رسانه ها و سرم هاي معتبر و با درجه بالا استفاده كنيد. همچنين آب و محيط كشت بايد به خوبي استريل شود.
تجهيزات آزمايشگاهي را استريل كنيد: تجهيزات آزمايشگاه را هميشه اتوكلاو كنيد، مانند نوك پيپت، ظرف ذخيره، بشر، فورسپس و غيره. قبل از آن، مطمئن شويد كه تجهيزات شما قابل اتوكلاو هستند!
امكانات را بررسي كنيد: به طور منظم مركز يا اتاقي را كه سلول ها در آن كشت مي شوند تميز و استريل كنيد. عملكرد جريان آرام و انكوباتورها را نيز بررسي كنيد. قبل از انجام آزمايش، سطح لامينار و ساير تجهيزات را با الكل 70 درصد پاك كنيد.
بررسي سلول‌هاي وارد شده: اگر سلول‌ها را از يك شركت يا آزمايشگاه‌هاي ديگر وارد مي‌كنيد، بهتر است سلول را با كشت كشت حداقل به مدت دو هفته بررسي كنيد. اين به شما كمك مي كند تا قبل از اينكه سلول ها را در مقياس بزرگ كشت كنيد، در واكنشگرها و تلاش خود صرفه جويي كنيد.
از قرار گرفتن سلول در محيط هاي استريل نشده اجتناب كنيد: هميشه سعي كنيد سلول ها را در يك محيط استريل نگه داريد. انتقال سلول ها از انكوباتور به هود بايد سريع باشد. اگر سلول هاي شما براي مدت طولاني بيرون مانده اند، آنها را در يك هود ديگر نگه داريد. اين به شما كمك مي كند تا كشت هاي ديگر خود را نيز نجات دهيد.
به طور منظم سلول هاي كشت شده را بررسي كنيد: شما كارهاي زيادي براي محافظت از سلول هاي خود انجام داده ايد و نميخواهيد در پايان كشت خود را آلوده كنيد! بنابراين، مراقب كشت هاي خود باشيد و به طور مرتب آنها را تماشا كنيد.
اگرچه، به احتمال زياد با دنبال كردن مراحل بالا مي‌توانيد كشت خود را نجات دهيد، دقيق بودن و سازگاري با «بهترين شيوه‌ها» به همان اندازه دشوار است. با اين روش ها فقط مي توانيد از آلودگي شيميايي و تا حدي آلودگي بيولوژيكي نيز جلوگيري كنيد. اما،با شروع مقاومت باكتري ها نسبت به آنتي بيوتيك ها، آنها ديگر بهترين راه حل براي جلوگيري از آلودگي بيولوژيكي در كشت شما باقي نمي مانند.