اتوكلاو آزمايشگاهي

2 روش استريليزاسيون مورد استفاده در كشت بافت گياهي

اگر در مورد كشت بافت گياهي مطالعه كرده‌ايد، مي‌دانيد كه شرايط استريل براي يك عمل موفق كشت در شرايط آزمايشگاهي چقدر مهم است. با اين حال، آيا از روش‌هاي مختلفي كه آزمايشگاه‌ها در سراسر جهان براي استريل كردن مواد، ريزنمونه‌ها و تجهيزات آزمايشگاهي استفاده مي‌كنند، اطلاعي داريد؟

آلودگي در كشت بافت گياهي شامل ناخالصي ها، مواد شيميايي يا عوامل بيماري زا است. اين عوامل بافت هاي كشت شده را براي رشد بيشتر گياهچه هاي سالم نامناسب مي كند. همچنين خلاص شدن از شر آلودگي به طور كامل دشوار است زيرا گياهان بسيار مستعد ابتلا به عفونت هاي پاتوژن هستند.

آلودگي هاي مختلفي وجود دارد كه مي تواند در آزمايش كشت بافت شما رخ دهد. ميكروارگانيسم‌ها مي‌توانند روي ليوان‌ها، پيپت‌ها يا ظروف كشت شما وجود داشته باشند. يك اسپور قارچي يا سلول باكتريايي كه در تماس با محيط كشت يا ريزنمونه ها قرار مي گيرد به سرعت مواد و ابزار كشت بافت گياهي را نيز آلوده مي كند. اگر مي‌خواهيد درباره ميكروارگانيسم‌هاي مختلف كه باعث آلودگي مي‌شوند بيشتر بدانيد، مقاله ما در مورد " انواع مختلف آلاينده‌ها در كشت بافت گياهي " را مطالعه كنيد.

محيط كشت بافت همچنين حاوي قند و ساير عناصري است كه بيشتر مستعد جذب ميكروب‌ها مانند باكتري‌ها، قارچ‌ها و غيره هستند. در طول سال ها، دانشمندان راه حل هاي مختلفي براي كاهش آلاينده هاي موجود ارائه كرده اند. اما آلودگي ها هنوز يكي از بزرگترين دغدغه ها در جهان كشت بافت گياهي است كه منجر به از دست دادن عملكرد و بهره وري در بين گياهان كشت شده مي شود.

اجازه دهيد اكنون روش‌هاي مختلف استريل كردن را كه معمولاً براي ريشه‌كني يا اجتناب از آلودگي‌ها استفاده مي‌شود، مورد بحث قرار دهيم:

اتوكلاو - استريل كردن با حرارت

استريل كردن محيط ها و ظروف شيشه اي

بسياري از آزمايشگاه ها از اتوكلاو براي استريل كردن محيط استفاده مي كنند كه بر اساس اصل گرماي مرطوب كار مي كند. استريليزاسيون با حرارت مرطوب روشي است كه در آن از بخار گرم شده و پرفشار براي استريل كردن يك شي (در دماي 121 درجه سانتيگراد، فشار 1.03 بار به مدت 15 تا 20 دقيقه) استفاده مي شود. شما مي توانيد ظروف آزمايشگاهي، ظروف شيشه اي، پيپت ها و محيط هاي كشت را با كمك اتوكلاو استريل كنيد. با اين روش مي توانيد تقريباً از شر همه ميكروب ها خلاص شويد. با اين حال، اتوكلاوها زماني كه فرآيند كلي در نظر گرفته شود، كار فشرده و زمان بر هستند. يك اتوكلاو حدود 2 تا 3 ساعت براي گرم كردن، استريل كردن و خنك شدن زمان مي برد.

امروزه، بيشتر صنايع ماشين‌هاي آماده‌كننده محيط با كارآمدي بالا را ترجيح مي‌دهند كه داراي يك گردش كار خودكار براي تهيه محيط هاي استريل شده هستند. اين ماشين‌ها از تكنيك‌هاي گرمايش مختلف با دقت زيادي استفاده مي‌كنند و در مقايسه با اتوكلاو زمان بسيار كمتري مي‌برند. تحقيقات نشان داده است كه يك محيط استريل شده بسيار سريع نه تنها مقاومت گياهچه هاي شما را در برابر بيماري ها افزايش مي دهد، بلكه باعث كاهش زمان چرخه رشد برخي از آنها و افزايش سرعت تكثير برخي ديگر مي شود.

استريلايزر - استريل كردن ابزار فلزي

ابزارهاي فلزي ممكن است با استفاده از استريليزاسيون مرطوب زنگ بزنند و كند شوند. بنابراين، اشيايي مانند نگهدارنده ها/ تيغه هاي چاقوي جراحي، پنس و غيره با استفاده از روش هاي حرارت خشك استريل مي شوند. اين استريل كردن با استفاده از ابزارهايي مانند استريلايزر يا استريل‌كننده‌هاي گلس بيد و مشعل‌هاي بونسن به دست مي‌آيد كه اولي كارآمدتر و ايمن‌تر از دومي است.

در مقاله بعدي به  دو روش ديگر  استريليزاسيون مورد استفاده در كشت بافت گياهي اشاره خواهد شد.

شركت دانش بنيان تجهيز فردوس تجهيزات مورد نياز شما را در حوزه كشت بافت تامين مي كند.

اين تجهيزات شامل: گلخانه هاي تحقيقاتي، اتاق هاي كشت بافت و رشد گياه، فيتوترون ها و ژرميناتورها، هود هاي لامينار كلاس 1 ، قفسه هاي نور كشت بافت و رشد گياه ،دستگاه هاي استريل كننده از قبيل اتوكلاو، آون و استريلايزر، ظروف، شيشه ها و مواد كشت بافت مي باشد.

جهت ارتباط با كارشناس تجهيزات كشت بافت سركار خانم فراستي پور تماس حاصل فرماييد.

شماره تماس: 09924040145

​

​

نحوه كاركردن با اتوكلاو آزمايشگاهي

اتوكلاو يك ظرف فلزي با ديواره ضخيم با مهر و موم هرمتيك است كه اجازه كار با بخار فشار بالا و دماي بالا را مي دهد كه براي استريل كردن مواد پزشكي يا آزمايشگاهي استفاده مي شود. اتوكلاو همه ويروس ها و باكتري ها را غيرفعال مي كند، اگرچه مشخص شده است كه برخي از ميكروارگانيسم ها مي توانند دماي اتوكلاو را تحمل كنند. اتوكلاوها عمدتاً در كاربردهاي استريليزاسيون و در صنايع شيميايي استفاده مي شوند.

بسياري از اتوكلاوها براي استريل كردن تجهيزات و لوازم با قرار دادن آنها در معرض بخار اشباع شده با فشار بالا در دماي 121 درجه سانتيگراد براي حدود 15 تا 20 دقيقه بسته به اندازه بار و محتويات استفاده مي شوند. اتوكلاو توسط چارلز چمبرلند در سال 1879 اختراع شد.

استريل كردن با بخار موثرترين روش است، زيرا با انعقاد پروتئين هاي ميكروارگانيسم ها عمل مي كند و در نتيجه منجر به تخريب آنها مي شود.

انواع اتوكلاو

مراحل عمليات اتوكلاو آزمايشگاهي

پارامترهايي كه بايد در اتوكلاو آزمايشگاهي كنترل شوند

شاخص هاي عقيم سازي اتوكلاو آزمايشگاهي

شاخص هاي فيزيكي، شيميايي و بيولوژيكي وجود دارد كه مي تواند براي اطمينان از رسيدن يك اتوكلاو به دماي مناسب براي مدت زمان مناسب استفاده شود. اگر يك مورد درمان نشده يا بد درمان شده را بتوان با يك مورد درمان شده اشتباه گرفت، خطر مخلوط شدن آنها وجود دارد كه در برخي از مناطق، مانند جراحي، بسيار مهم است.

برخي از شاخص‌هاي فيزيكي شامل آلياژي هستند كه فقط پس از قرار گرفتن در دماي معين براي زمان ماند مربوطه، ذوب مي‌شوند. اگر آلياژ ذوب شود، تغيير قابل مشاهده خواهد بود.

نشانگرهاي شيميايي روي بسته‌بندي‌هاي پزشكي و نوار اتوكلاو يافت مي‌شوند، زيرا پس از برآورده شدن شرايط صحيح، تغيير رنگ مي‌دهند كه نشان مي‌دهد كالاي داخل بسته يا زير نوار به درستي پردازش شده است.

شاخص هاي بيولوژيكي حاوي هاگ هاي يك باكتري مقاوم در برابر حرارت، Geobacillus stearothermophilus است. اگر اتوكلاو به دماي مناسب نرسد، هاگ ها هنگام انكوبه شدن جوانه مي زنند و متابوليسم آنها رنگ يك ماده شيميايي حساس به pH را تغيير مي دهد.

ملاحظات

اتوكلاوها از بخار با فشار بالا و دماي بالا براي استريل كردن استفاده مي كنند. خطرات بالقوه هستند و بنابراين بايد ملاحظات خاصي را دنبال كرد.

خطرات احتمالي:

• سوختگي پوست مي تواند در اثر دست زدن به ديوارها و درب محفظه اتوكلاو ايجاد شود.
• بخار باقي مانده از اتوكلاو و مواد در پايان چرخه استفاده.
• صدمات دست و بازو هنگام بستن در.
• آسيب بدني در صورت وقوع انفجار.

براي اطمينان از سلامت و ايمني پرسنل با استفاده از اتوكلاو، مهم است:

• كاركنان را در مورد استفاده صحيح از اتوكلاو آموزش دهيد.
• نام شخص مسئول اتوكلاو بايد در نزديكي اتوكلاو درج شود.
• اين مسئوليت سرپرست است كه اطمينان حاصل كند كه كاركنان قبل از راه اندازي هر واحد اتوكلاو آموزش ديده اند.
• رويه و مدارك دستورالعمل ارائه شده توسط سازنده بايد رعايت شود.
• هنگام بارگيري و تخليه اتوكلاو بايد از لباس ها و تجهيزات محافظ شخصي استفاده شود.
• اتوكلاوها بايد حداقل سالي يكبار بازرسي شوند.
• از نوارهاي اسپور مي توان براي تاييد اثربخشي عمليات اتوكلاو استفاده كرد.

تجهيزات محافظتي در برابر سوختگي عبارتند از:

• دستكش هاي عايق حرارتي كه پوشش كامل دست و ساعد را فراهم مي كند
• روپوش آزمايشگاهي
• محافظت از چشم
• كفش هاي بسته

براي استريليزاسيون بسيار مهم است كه بخار:

• پاك: يعني بخاري كه از آب تميز، يعني آب صاف شده و عاري از مواد آلوده كننده مانند كادميوم، منيزيم، سرب يا كلر و غيره تشكيل مي شود.
• خالص: به اين معني كه وجود آب به صورت مايع بسيار كم است، زماني كه كمتر از 3 درصد باشد در نظر گرفته مي شود.

براي اينكه عقيم سازي موثر باشد:

• بخار بايد در تماس مستقيم با مواد استريل شود (بنابراين بار عناصر بسيار مهم است).
• براي جابجايي تمام هواي اوليه موجود در اتوكلاو و جايگزيني آن با بخار، خلاء مؤثر ايجاد كنيد.

​

​

 ​

انواع استريل كننده (اتوكلاو) همراه با كاربرد

انواع استريل كننده ( اتوكلاو ):

• استريل كننده هاي بخار عمودي
• استريل كننده هاي بخار افقي
• دستگاه ضدعفوني كننده بخار روميزي

استريليزاسيون با بخار در دسترس ترين و پركاربردترين روش استريليزاسيون است. اين روش غير سمي، مقرون به صرفه، مناسب براي پردازش مواد ناپايدار حرارتي است، خطر عفونت متقاطع را از بين مي برد و در برابر تمام عوامل بيولوژيكي، از جمله، بسيار موثر است. پريون ها اين روش توسط سازمان بهداشت جهاني و مركز كنترل بيماري ها براي استفاده در موسسات پزشكي توصيه شده است.

روش استريليزاسيون با بخار، كه در اتوكلاوها انجام مي شود، شامل تصفيه مواد با بخار آب در دما و فشار معين براي مدت زمان مشخص است.

بنابراين، ويژگي هاي اصلي استريليزاسيون با بخار عبارتند از :

• بخار – “خشك” (گرم شده تا دماي بالاتر از نقطه جوش) بخار ترجيح داده مي شود.
• فشار – لازم براي رسيدن به دماي بالا در اتوكلاو؛
• دما – به عنوان يك قاعده، 121 درجه سانتيگراد و 132 درجه سانتيگراد؛
• زمان – دماي تنظيم شده بايد براي حداقل زمان لازم براي تخريب عوامل بيولوژيكي در محفظه حفظ شود. براي تجهيزات پزشكي بسته بندي شده، حداقل زمان استريليزاسيون: 30 دقيقه در دماي 121 درجه سانتيگراد و 4 دقيقه در دماي 132 درجه سانتيگراد است. زمان استريليزاسيون ممكن است بسته به نوع محصول و مواد متفاوت باشد.

از نظر ساختاري، ضدعفوني كننده ها (اتوكلاوها) به دو نوع تقسيم مي شوند:

ضدعفوني كننده هايي كه هوا را به صورت گرانشي از محفظه خارج مي كنند و دستگاه هاي پيش تخليه. در استريل كننده هاي نوع اول، بخار از بالا يا از طرفين وارد محفظه مي شود و هوا را به قسمت پاييني محفظه استريليزاسيون مي فشارد و سپس از طريق خروجي خارج مي شود. ضدعفوني كننده هاي گرانشي عمدتاً براي پردازش محيط هاي آزمايشگاهي، مايعات، مواد دارويي و محصولات غير متخلخل كه سطوح آنها در تماس مستقيم با بخار است استفاده مي شود. در استريل كننده هايي از اين نوع زمان استريل شدن مواد متخلخل افزايش مي يابد كه به دليل حذف ناقص هوا و در نتيجه كاهش سرعت نفوذ بخار به داخل منافذ مي باشد. ضدعفوني كننده هاي خط مقدم با كارايي بالا مجهز به پمپ خلاء براي حذف هوا از محفظه و بار استريليزاسيون هستند. بنابراين، بخار به راحتي مي تواند حتي در مواد متخلخل نفوذ كند. استريل كننده ها همچنين از نظر نحوه بارگيري (افقي و عمودي)، تعداد برنامه هاي استريليزاسيون و عملكردهاي اضافي متفاوت هستند.

​